כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC) היא טכניקה יעילה להפרדה וניתוח, המסוגלת להפריד תערובות ולנתח באופן כמותי את הרכב כל מרכיב. HPLC נמצאת בשימוש נרחב בתחומים מדעיים רבים, כולל פרמצבטיקה, מזון, קוסמטיקה, תוספי תזונה, סמים, מדע פלילי וסביבה.
תרשים מערכת סינון רציפה של VFC
להלן תרשים המערכת של מערכת הסינון הרציפה VFC. לפרטים נוספים, ניתן לצפות בסרטון ההתקנה או לעקוב אחר השלבים הבאים:
הרכבת הציוד:
- חבר את מתאם GL45 ואת מחזיק המסנן הזכוכיתי VFC 47 לבקבוק GL45 לפי הסדר.
- חבר את צינורות הסיליקון לפי התרשים.
- אם נעשה שימוש בבקבוק ארלנמאייר, הכנס את פקק הסיליקון מס' 8 ישירות לפתח הבקבוק או החלף לפי הגודל המתאים.
הנחת הממברנה:
- הנח את הממברנה על גבי תושבת הסינון VFC 47, החזר את מכסה הזכוכית, ומהדק בחוזקה עם מהדק האלומיניום.
התחלת הסינון:
- הנח את המשקולת (המחוברת לצינור הסיליקון) בתוך התמיסה הלא מסוננת.
- הפעל את משאבת הוואקום כדי להתחיל את תהליך הסינון.
אחסון:
- לאחר הסינון, נתק את הצינורות, מחזיק המסנן והמתאם.
- כבה את המשאבה.
- אטום את הבקבוק עם מכסה GL45 המקורי כדי לאחסן את הממס ישירות.
למה צריך לסנן את הפאזה הניידת ב-HPLC?
איכות הפאזה הניידת משפיעה ישירות על הדיוק, השחזור ואורך החיים של המערכת. ממסים נפוצים כמו אצטוניטריל (ACN), מתנול (MeOH) או חומצה פורמית עלולים להכיל בועות, חלקיקים, מזהמים או מיקרואורגניזמים.
זיהומים אלה יכולים לגרום לנזקים כמו:
- סתימות בעמודה
- רעש רקע מוגבר
- קיצור אורך חיי המכשור
מה ההשלכות של אי סינון הפאזה הניידת?
- סתימת העמודה: הצטברות חלקיקים פוגעת ביציבות קצב הזרימה, משנה את זמני השהייה ומקצרת את חיי העמודה.
- נזק למשאבה: חלקיקים עלולים לשחוק את הבוכנה והאיטומים, לגרום לסטיות בקו הבסיס ולשינויים בזרימה.
- סתימת מערכתית: גורמת ללחץ נגד מוגבר ואף להשבתת המערכת.
- הפרעה לניתוח: עלולה ליצור רעש, אותות רקע, ואף פיקים שקריים ("פיק רפאים").
- זיהום מיקרוביאלי: בופרים מימיים מעודדים צמיחה מיקרוביאלית, דבר שיכול לזהם את הפתרון ולסתום את המערכת.
בנוסף, שיטות רבות ב-HPLC כוללות ערבוב ממסים או הוספת מלחים (כמו פוספטים או אצטטים), שעשויים ליצור חלקיקים אם לא נמסים לגמרי. לכן מומלץ לסנן לפני השימוש.
סינון מראש חשוב לשמירה על ניקיון הפתרון, הגנה על המערכת, הארכת חיי העמודה והשגת תוצאות מדויקות ומשוחזרות.
כיצד לבחור ממברנת סינון?
בחירת הממברנה הנכונה קריטית להבטחת סינון אפקטיבי. הבחירה נעשית לפי מערכת HPLC הספציפית והיישום:
| גודל נקבוביות | מטרה | חומרים נפוצים |
| 0.45 מיקרון | סינון כללי של פאזה ניידת | PTFE, ניילון |
| 0.2 מיקרון | UPLC / UHPLC או עיקור | PVDF, PTFE |
החומר נבחר גם בהתאם לתכונות הכימיות של הממס: PTFE, PVDF, ניילון ועוד.
להלן סוגי ממברנות המוזכרות בשיטות שאושרו על ידי רשות המזון והתרופות של טייוואן (TFDA).
מדוע סינון משפר את יציבות HPLC?
שיטת הסינון בוואקום היא הנפוצה ביותר לסינון פאזות ניידות. היא מסירה ביעילות חלקיקים ומזהמים, מונעת חסימות מערכת, מפחיתה בלאי וזיהום, ומאריכה את חיי החלקים המתכלים.
בנוסף, הסרת מזהמים מפחיתה רעש אותות ומובילה לתוצאות אנליטיות חדות ואמינות יותר.
הסינון בוואקום גם מסייע בדה-גז (הסרת חמצן מומס), מה שמפחית תהליכי חמצון במדגם ובממס – ומעלה את רגישות הגלאי ויציבות המערכת.
בקצרה: סינון הפאזה הניידת הוא הדרך הפשוטה והחסכונית ביותר לשמור על ביצועי HPLC ולבצע ניתוח איכותי.
איך מבצעים סינון לפאזת ניידת ב-HPLC?
באופן מסורתי, משתמשים במשפך זכוכית ובקבוק ארלנמאייר – אך גישה זו כרוכה בסיכונים:
- לאחר הסינון יש להעביר את הממס לבקבוק אחסון, מה שעלול לגרום לדליפות וזיהומים צולבים.
- יש למזוג את הממס ידנית, פעולה שעלולה לגרום לשפיכה עקב תנועה לא יציבה של היד או זווית לא נכונה.
- עבור ממסים נדיפים או רעילים – האדים עלולים לפגוע בעיניים, בפה או באף של המפעיל, ומהווים סכנה בריאותית בחשיפה ממושכת.
