סינון-בדיקות סטריליות: מדריך מקיף

בדיקת סטריליות היא שיטה מיקרוביולוגית שנועדה לבדוק האם מוצר אשר נדרש להיות סטרילי אכן אינו מזוהם על ידי מיקרואורגניזמים. בדיקה זו מיושמת בעיקר בתעשיות התרופות, הביוטכנולוגיה והציוד הרפואי.

מטרת בדיקת הסטריליות

בדיקות סטריליות מיועדות למרבית המוצרים הפרמצבטיים שדורשים סטריליות, כולל תרופות להזרקה, טיפות עיניים, תרופות מוצקות ומגוון רחב של מכשירים רפואיים סטריליים. תחום היישום של בדיקות אלה רחב מאוד.

במידה שמוצרים אלה מזוהמים במיקרואורגניזמים, הם עלולים לאבד מיעילותם או לגרום לזיהומים ואף לסיבוכים רפואיים חמורים בעת מגע עם גוף האדם. לכן, מטרתה המרכזית של בדיקת הסטריליות היא להבטיח שמוצרים שעברו ייצור אספטי או עיקור סופי יהיו נקיים לחלוטין ממיקרואורגניזמים חיים, כדי להבטיח את בטיחותם ויעילותם בשימוש קליני.

הגדרת סטריליות ותקנים בינלאומיים

מהי סטריליות?

סטריליות מוגדרת כהיעדר מוחלט של מיקרואורגניזמים חיים בדגימה – דרישה בסיסית לבטיחות של מוצרי תרופות. המדד הבינלאומי להערכת רמת הסטריליות הוא רמת הבטחת הסטריליות (Sterility Assurance Level - SAL). מוצר נחשב לסטרילי כאשר SAL קטן או שווה ל-10⁻⁶, כלומר הסיכוי לזיהום מיקרוביאלי הוא אחד למיליון או פחות.

תקנים בינלאומיים לבדיקות סטריליות

תקנים כגון ISO 11737-2, USP <71>, EP, JP ופרמקופיאה סינית קובעים את הדרישות לבדיקת סטריליות, לרבות תנאי סביבה, הכנת דגימות ונהלי עבודה. תקנים אלה מבטיחים תאימות עולמית ומהימנות התוצאות.

כיצד מתבצעת בדיקת סטריליות?

שתי שיטות בדיקה עיקריות הן:

שיטת סינון דרך ממברנה (Membrane Filtration)
שיטת הזרעה ישירה (Direct Inoculation)
על פי הדרישות של Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme (PIC/S), שתי השיטות חייבות להתבצע בתנאים אספטיים באזור סטרילי דרגה A בתוך סביבה דרגה B. בחירת השיטה תלויה באופי הדגימה.

שיטה 1: סינון דרך ממברנה

שיטה זו מתאימה לדגימות נוזליות, מוצקות ומכשירים רפואיים עם צנרת ניתנת לשטיפה וסינון.

עקרון הפעולה: הדגימה מסוננת דרך ממברנה בעלת גודל נקבוביות קטן מ-0.45 מיקרון, שתופסת את המיקרואורגניזמים. הממברנה מועברת למצע גידול ומודגרת לבדיקת נוכחות מיקרואורגניזמים חיים.

ציוד נדרש:
משאבת ואקום, מערכת סינון רב-סעיפית למעבדה, ממברנות סינון, כוסות סינון מנירוסטה (שניתן לעקר באוטוקלב או באש באמצעות מבער).

שלבי העבודה בשיטת הסינון:

קדם-טיפול בדגימה: בהתאם לסוג הדגימה, יתבצע דילול או חימום כדי לשפר את הסינון.
סוג הדגימה

שיטת קדם-טיפול

נוזלים סינונים

לדלל בנוזל סטרילי אם צמיג מדי

משחות ושמנים

להמיס באיזופרופיל מיריסטט, לחמם עד 44°C

אנטיביוטיקה מוצקה

להמיס בתמיסה סטרילית

מכשירים רפואיים

לשטוף בתמיסה סטרילית ולסנן את נוזל השטיפה

סינון הדגימה:
העבר את הדגימה שטופלה לתוך משפכי הסינון. השתמש במשאבת ואקום ליצירת לחץ שלילי לצורך סינון.
הדגרת הממברנה:
העבר את הממברנה למצע גידול מתאים, אטום והדגר בטמפרטורה מתאימה למשך 14 יום או יותר.
פענוח תוצאות:
בדוק האם מצע הגידול הפך עכור. אם לא – הדגימה סטרילית. אם כן – יש נוכחות של מיקרואורגניזמים חיים.
שיטה 2: הזרעה ישירה

שיטה זו מיועדת לדגימות שלא ניתן לסנן, כמו מוצקים בלתי מסיסים או מכשירים רפואיים שלא ניתנים לסינון.

עקרון הפעולה: הדגימה מונחת ישירות בתוך מצע גידול ומודגרת לניטור גדילה מיקרוביאלית.

שלבי העבודה בשיטת ההזרעה הישירה:

הכנת הדגימה:
סוג הדגימה

שיטת הכנה

דגימות מוצקות

להמיר לתרחיף בעזרת ממס מתאים

דגימות נוזליות

להוסיף ישירות למצע גידול

מכשירים רפואיים

לטבול את המכשיר כולו או חלק רלוונטי בתוך מצע גידול

הדגרת מצע הגידול:
לאטום את המצע ולהדגיר למשך 14 יום לפחות.
פענוח תוצאות:
בדוק את מצע הגידול לעכירות. אם לא השתנה – הדגימה סטרילית. אם כן – יש זיהום.
השוואת שיטות: סינון ממברנה לעומת הזרעה ישירה

פרמטר

שיטת סינון ממברנה

שיטת הזרעה ישירה

סוגי דגימות מתאימים

נוזלים, דגימות מסיסות, מכשירים עם צנרת

דגימות שלא ניתנות לסינון: צמיגות גבוהה, מוצקים מיוחדים

עקרון פעולה

סינון דרך ממברנה (≤0.45μm) והדגרה של הממברנה

הזרעה ישירה במצע גידול

ציוד נדרש

ממברנות, משאבת ואקום, מערכת סינון, ציוד עיקור

מצעי גידול, מיכלים סטריליים

משך הדגרה

14 יום או יותר

14 יום או יותר